理论要点之免疫学：免疫学检测技术

一、血清学技术

（一）抗原抗体反应原理

1.特异性

2.亲和力（affinity）和亲合力（avidity）

3.可见性：可溶---沉淀/凝集

（二）沉淀反应（precipitation）

1.可溶性抗原与抗体反应形成沉淀物

2.单向免疫扩散（singleimmunodiffusion）

3.双向免疫扩散（doubleimmunodiffusion）

4.免疫电泳（immunoelectrophoresis）

（三）凝集反应（agglutination）

1.颗粒性抗原（细菌/红细胞）与抗体结合后形成凝集团块

2.直接凝集反应：ABO

3.间接凝集反应：用乳胶颗粒或红细胞包被抗原

（四）补体参与的反应

1.RBC+Ag,

2.Ab

3.C'---溶RBC

二、标记抗原或抗体的Ag-Ab反应

（一）免疫荧光法（immunofluorescence）

1.直接荧光法

2.间接荧光法

（二）酶免疫法（enzymeimmunoassay,EIA）

1.酶联免疫吸附试验（ELISA）

（1）双抗体夹心法

（2）间接法

（3）BAS-ELISA：生物素（biotin）,亲和素（avidin）

2.酶联免疫斑点试验（enzyme-linkedimmunospotassay,ELISPOT）

3.免疫组化（immunohistochemistry）

（三）放射免疫（radioimmunoassay,RIA）

（四）化学发光法（chemiluminescenceimmunoassay,CLIA）

（五）免疫印迹法（immunoblotting）,WesternBlottingSDS-PAGE（HIV）

（六）免疫PCR（immuno-PCR,IM-PCR）

三、淋巴细胞分离及检测技术

（一）淋巴细胞的分离与类型鉴定

1.分离：

（1）密度梯度离心法，尼龙毛，抗CD3法，SRBC

（2）流式细胞术（flowcytometry）

（3）磁珠分离法

2.鉴定：

（1）免疫荧光法，磁珠法，淘选法，

（2）流式细胞术（flowcytometry）

（3）磁珠分离法

（4）荧光激活细胞分选器（fluorescenceactivatedcellsorter,FACS）

（五）抗原肽-MHC分子四聚体技术（avitin*--biotin-MHC/peptide）

（二）T细胞功能测定

1.T细胞增殖试验

3H-Tdr掺入法（胸腺嘧啶核苷）

MTT法（3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基溴化四唑）

（细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶的底物，形成蓝色甲臢颗粒，可被盐酸异丙醇溶解）

2.细胞毒试验

51Cr释放法（Na251CrO4标记靶细胞，测释放）

乳酸脱氢酶释放法（细胞膜损伤，释放）

凋亡细胞检查法

3.皮肤试验

（三）B细胞功能测定

1.B细胞增殖试验

2.抗体形成细胞测定，溶血空斑试验（hemolyticplaqueassay）

（四）吞噬细胞功能测定

1.趋化功能测定

2.吞噬功能测定

四、细胞因子检测

（一）生物活性测定法

（二）免疫学检测法（ELISA）

（三）DNA聚合酶链反应（PCR法）

（四）皮肤试验

五、疾病的诊断

（一）感染性疾病

（二）免疫缺陷病

（三）自身免疫病

（四）超敏反应性疾病

（五）肿瘤